尊龙凯时的SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS

传代方法：第一次建议1:2传代，2天换液。备注：用无菌离心管收集瓶中培养基，以便进行对比培养，如果对比效果不佳，建议直接选购尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待其达到良好状态后，加入完全培养液并封严瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台中进行无菌操作，将细胞瓶放入35℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞生长情况并进行不同倍数的拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，未提供照片视为细胞状态良好。建议在传代后使用原瓶的完全培养基与自配的完全培养基进行文件对比，并在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，从培养瓶中收集完全培养液至离心管中，保留5ml培养基放入35℃、5% CO₂的培养箱培养；若细胞密度超过80%，进行以下步骤： 1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤1-2次。 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于35℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆脱落，迅速取出操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。 3. 吹打细胞使之完全脱落后吸出，转入15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液并补加1-2ml完全培养基重悬。 4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，并放入35℃、5% CO₂的细胞培养箱继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗。 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩形态，随后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。 3. 弃去上清后，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001）混匀，转入冻存管中。 4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入35℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%的酒精擦拭外壁。 2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。 3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入35℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。 4. 第二天及时更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。如脱落量较大，可按以下方式处理：将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作为过渡培养；沉淀粒加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，然后再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。最终按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入35℃、5% CO₂培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况及标准： - 细胞在运输途中出现问题（如丢失、瓶身破损、培养液漏液等）可重发； - 对于细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发； - 常温发货细胞在静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时大部分死亡的，需提供清晰的细胞状态照片，可重发； - 干冰发货细胞在复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时无开封后出现污染的情况可重发； - 对于细胞活性问题，如在收到产品7天内提供实验结果并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发； - 收到细胞的当天及第2、3天需拍照，若未告知，则视为产品合格；在4-7天内出现问题需提交前三天照片及操作步骤以供核验，技术人员将判断责任。如为我方责任，予以重发；如责任双方需协商处理，重发费用按合同价的50%收取。 2）细胞出现问题不予重发的情况： - 客户自造成的细胞污染不予重发； - 非法操作导致细胞状态不佳不予重发； - 非本库推荐培养体系导致细胞状态不佳不予重发； - 未能提供培养前三天照片的，不予重发； - 处理过的细胞不予重发； - 收到两天内未告知的，不予重发； - 具体情况视不同而定。